3- Молекулярно-цитогенетический метод генетического анализа человека

Молекулярно-цитогенетический метод анализа хромосом дает возможность преодолеть ограничения цитогенетического метода в его клас-

сическом формате. Так, в кариотипе обследуемого удается обнаружить хромосомные аберрации, даже если их несколько и они произошли в разных хромосомах, а также, если они захватывают участок хромосомы относительно небольших размеров.

Основу метода составляет процедура флуоресцентной гибридизации in situ (англ. FISH – fluorescent in situ hybridization). Речь идет о приготовлении ДНК-зондов, представляющих собой определенные по нуклеотидному составу фрагменты ДНК, помеченные флюорохромом (флюоресцирующий краситель). В указанной конструкции функцию зонда выполняет фрагмент ДНК, который находит в геноме (генотипе, кариотипе) обследуемого «свой» – т.е. комплементарный – участок ДНК и прикрепляется к нему («садится» на него). Благодаря наличию в конструкции флюорох-рома место «посадки» ДНК-зонда определяется по специфическому свечению при микроскопировании гистологических препаратов. При этом обычно используют люминесцентный микроскоп, допускающий работу в УФ части спектра. Объектом микроскопирования могут быть как метафаз-ные хромосомы (см. п. 5.2.2.3, цитогенетический метод), так и хроматин ядер неделящихся клеток (интерфазные хромосомы).

Молекулярно-цитогенетический метод (FlSH-метод в различных его модификациях, например, с одновременным использованием нескольких флюорохромов, дающих разную окраску; известна технология 24-цветная FISH для одномоментной идентификации и нумерации 22 ау-тосом, хромосом Х и У), в сравнении с классическим вариантом цитоге-нетического исследования, позволяет провести анализ количественных изменений и структурных перестроек хромосом быстрее и эффективнее. В силу этого ему отдают предпочтение в ситуациях, требующих проведения высокоинформативной экспресс-диагностики (пренатальное выявление хромосомных аберраций). При соблюдении ряда технических условий он дает возможность идентифицировать места хромосомных разрывов при транслокациях, инверсиях, делециях.

FISH молекулярно-цитогенетический анализ в силу того, что он позволяет локализовать ген (нуклеотидную последовательность ДНК) на хромосоме, нашел применение при составлении физических карт хромосом (см. п. 4.3.2.1) человека. В практике МГК он используется в целях уточнения характера генетического дефекта (ДНК-диагностика), вызвавшего патологические фенотипические проявления у пациента (про-банда), или же для подтверждения факта гетерозиготного носительства «проблемного» рецессивного аллеля (например, фенилкетонурии) потенциальными родителями (супругами).

Рейтинг
( Пока оценок нет )
Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
yamedik
Добавить комментарий
Adblock
detector