МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Микроскоп. Этот оптический прибор позволяет наблюдать мелкие объекты. Увеличение изображения достигается системой линз объектива и окуляра. Зеркало, конденсор и диафрагма направляют световой поток и регулируют освещение объекта. Механическая часть микроскопа включает: штатив, предметный столик, макро- и микрометрический винты, тубус, тубусодержатель.

Ротационный микротом. Блоки, содержащие кусочек органа, закрепляют в подвижном объектодержателе. При его опускании на ноже остаются серийные срезы, их снимают с ножа и монтируют на предметное стекло для последующей обработки и микроскопирования.

Соотношения между реальными трёхмерными структурами и их срезами, дающими двухмерные изображения. На рисунке показаны различные сечения изогнутой трубчатой структуры (например, кишки). Стрелки указывают, как отдельные элементы трёхмерного (3D) объекта представлены в двухмерном (2D) изображении на гистологическом препарате.

Направления сечений и используемые термины (на примере зародыша человека). А, Б - вид спереди (вентральная сторона) 6-недельного эмбриона; В - вид сбоку (латеральная сторона) 7-недельного эмбриона.

Иммуноцитохимическая реакция. А - Прямой метод предполагает использование меченых антител против интересующего антигена. Антитела взаимодействуют с антигенами в местах их локализации. Эти места выявляют при помощи метки, связанной с антителами; Б - Непрямой метод предполагает использование двух различных антител. Первые антитела реагируют с антигенами ткани. Связанные с меткой вторые антитела специфически взаимодействуют с первыми

антителами, которые для вторых антител являются антигеном. Метод значительно чувствительнее прямого, так как с каждой молекулой первых антител связывается несколько молекул вторых антител, содержащих метку (например, пероксидазу).

Мотонейроны спинного мозга. Клетки прореагировали с антителами к белку теплового шока (Hsp - heat shock protein). Hsp - молекулы-шапероны, отвечают за транспорт белков, их нативную конформацию, транслокацию белков через мембраны, контролируют образование трёхмерной структуры белка, предотвращают агрегацию белков.

Сортировка клеток методом проточной цитометрии. В культуральной среде специфические антитела, конъюгированные с флуоресцентным зондом, связываются с антигеном на поверхности клеток (например, с CD34+ на мембране стволовой кроветворной клетки). Под давлением клетки проходят по капилляру, где меченые CD34+ клетки под действием лучей лазера получают отрицательный электрический заряд. В электрическом поле происходит разделение клеток, несущих положительный или отрицательный заряд.

Гибридизация in situ. ДНК-

зонд связывается с комплементарным участком информационной РНК в исследуемом образце. Визуализация связанного с меткой ДНК-зонда указывает на экспрессию гена-мишени в конкретном клеточном типе.

Гибридизация in situ. Стрелками указаны участки локализации Y-хромосомы, ДНКзонд: ген sry. Свежезамороженный срез. [6]

Окрашивание ядер при помощи красителя DAPI (4,6-диамидино-2-фенилиндол дигидрохлорид). DAPI образует флюоресцирующий комплекс с ДНК. Возбуждающий ультрафиолетовый свет вызывает люминесценцию голубого цвета. На препарате выявлены ядра эпителиальных клеток лёгочных альвеол.

Мотонейрон спинного мозга. Для изучения аксонного транспорта применяются молекулы-трэйсеры, транспортирующиеся по аксону в антероградном или ретроградном направлениях. На препарате ретроградный флуоресцентный зонд FluoroGold характеризует дендриты и перикарион двигательного нейрона.

YAmedik.org